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本试剂盒可监测细胞活力，使用中会有大量的数据指标。本试剂盒中的成分不需要提前配制，使其比其他基于四唑细胞毒性比色鉴定的试剂盒（如MTT、XTT）有更高的灵敏性。

• 本试剂盒的高灵敏度，零放射性，无水洗操作，使其更适合细胞增殖的高通量分析和不同的混合物的毒性分析。
  
• 本试剂盒检测稳定且低毒性，因此操作时要有更长的孵育时间（大概24到48小时）。
  
• 本试剂盒使用简单，方便，适用于实验室中常见的实验器皿，可在96孔细胞板和384微量滴定板中操作。

• 向具有黑色的侧壁和透亮底部的微型细胞培养板中每孔加入100到10000个细胞，每孔添加测试化合物，在37℃,5% CO₂细胞培养箱中孵育所需要的时间（如24小时、48小时或96小时）。未加细胞的空白对照，加入相同量的化合物，建议96孔板中每孔总体积100μL，384细胞微量板中加入50μL。
  
• 同时要建立下述的实验对照组。
  
  • 阳性对照组：含有细胞并已知细胞增殖或细胞毒曲线；
    
  • 阴性对照组：含有细胞，不加测试化合物；
    
  • 空白对照组：含有细胞，加入溶解化学试剂的溶剂；
    
  • 无细胞对照组：仅含有细胞生产培养基，无细胞。
    
  • 化合物测试对照组：含有溶解测试化合物的溶剂比如汉克平衡缓冲液（HBSS）或磷酸盐缓冲液（PBS）和测试化合物。某些测试化合物有很强的自荧光性，可能会导致假阳性。
    注意：所有的对照组中，要用培养基保证96孔板中总体积是100μL，384微型培养板中总体积50μL。
• 室温解冻成分A，并使其回温至37℃，实验前彻底摇匀。
  
• 96孔细胞培养板中加入Assay Solution每孔20μL，,384微型培养板中每孔10μL，轻轻摇培养板30秒。
  
• 在37℃,5% CO₂细胞培养箱中避光孵育1到24个小时。
  注意：应根据不同细胞类型的代谢率和细胞浓度，确定最佳的孵育时间；由于过长孵育时间可能会使指示剂转变为无色的化合物，所以不推荐延长孵育时间。
  
• 分别读取570nm和605nm处的吸光值，得到OD570和OD605的比值，来计算每孔的细胞活力。
  注意：补加培养基保证96孔板中每孔总体积100μL，384微型细胞培养孔中每孔总体积50μL。

• 背景荧光值是有细胞孔的荧光值和无细胞孔的值相减得到。
  注意：补加培养基保证96孔板中每孔总体积100μL，384微型细胞培养孔中每孔总体积50μL。
  
• 每孔的吸光值表明了每孔的细胞数目。
  
• 下面的公式是样品细胞活力比率和相应的曲线：
  ％ cell viability = 100×(R_sample–R₀)/(R_ctrl–R₀)
  R_sample是添加测试化合物的OD₅₇₀/OD₆₀₅吸光度比值；
  R_ctrl是未加测试化合物（只加了测试化合物溶剂的孔）组的OD₅₇₀/OD₆₀₅吸光度比值；
  R₀是无细胞组的OD₅₇₀/OD₆₀₅吸光度比率的平均值。
  
  图1.CHO-K1细胞数目的响应值就是用Cell Meter比色细胞毒性检测试剂盒所测，使用柯仕达厂家的黑色侧壁透明底部的96孔细胞培养板，每孔总体积100μL，设置0到10000个细胞梯度并加入测试试剂，过夜培养。每孔加入20μL Assay Solution，37℃，孵育3小时。光吸收酶标仪分别读取570nm和605nm处的吸光值，OD₅₇₀/OD₆₀₅的值和如图所示的细胞数目成正比例。